换一批禽4型腺病毒单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用
Preparation,Identification,and Preliminary Application of Monoclonal Antibodies against Fowl Adenovirus Serotype 4
摘要本研究旨在制备禽4型腺病毒(fowl adenovirus type 4,FAdV-4)的单克隆抗体,鉴定其特异性结合位点,并评估其在免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和免疫沉淀反应中的应用价值.使用纯化的FAdV-4-AH-F41株全病毒免疫小鼠,通过间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法筛选出一株阳性杂交瘤细胞并进行亚克隆,并对所制备的单克隆抗体进行效价检测.利用间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)与蛋白免疫印迹(Western blot)方法鉴定单克隆抗体生物学特性,构建了 pCold TF-Hexon、pET-32a(+)-Fiber1、pCold TF-Penton、pCold TF-Fiber2 的原核表达载体,并通过 Western blot 初步鉴定所得单克隆抗体的特异性结合位点,在检测出抗体的亚型后,将其初步应用于IHC和免疫沉淀试验.结果表明本试验获得1株稳定分泌抗Fiber1蛋白的单克隆抗体,并将其命名为5C7.该抗体效价为1∶102 400,亚型为IgG-2b,表现出良好的生物学特性.在IHC中,能够观察到明显的病变特征;在免疫沉淀试验中,5C7可作为捕获抗体,与病毒感染细胞中的Fiber1蛋白特异性结合.结果提示,本试验通过全病毒粒子免疫小鼠所制备的单克隆抗体能够特异性识别Fiber1蛋白,并在IHC和免疫沉淀反应中显示出良好的应用前景,为FAdV-4实验室病理诊断方法的建立和Fiber1蛋白的功能研究奠定了基础.
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关键词
血清4型禽腺病毒单克隆抗体抗体鉴定Fiber1蛋白IHC免疫共沉淀serotype 4 of fowl adenovirusmonoclonal antibodyantibody identificationfiber 1 proteinIHCimmunoprecipitation
分类号
S852.659.1
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2025.05.033
发布时间
2025-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31972642）
安徽省重点研究与开发计划项目（202204c0602003）
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