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猪内源性逆转录病毒检测的三重PCR方法的建立及其在五指山猪组织样品检测中的初步应用

Establishment of a Triple PCR Method for the Detection of Porcine Endogenous Retroviruses and Its Preliminary Application to the Detection of Wuzhishan Pig Tissue Samples

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摘要本研究旨在建立可同时检测猪基因组中的猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)并鉴别PERV-A、PERV-B、PERV-C三种亚型PERV的三重PCR检测方法.根据PERV不同亚型囊膜(env)基因设计特异性引物,经反应条件和反应体系优化后对该方法进行特异性、敏感性及重复性试验验证.结果表明:本研究建立的三重PCR检测方法特异性强,可特异性扩增三种亚型PERV目的基因,对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒扩增结果呈阴性;该方法的敏感性较好,对PERV-A、PERV-B、PERV-C质粒标准品的检测下限分别为1×102、1×103和1×102拷贝·μL-1;采用建立的三重PCR方法检测103份组织样品,其中PERV-A的阳性率为100％(103/103),PERV-B的阳性率为100％(103/103),PER V-C的阳性率为54％(56/103),与经典单重PCR方法进行比较,符合率分别为100％、100％、96.6％.本研究成功建立了一种特异性强、敏感性较好、快速简便的三重PCR方法,可用于PERV三种亚型同时检测的鉴别诊断,为筛选无PERV的猪源供体器官提供技术支撑.