换一批基于RPA-CRISPR/Cas12a的MSTN基因编辑猪检测方法的建立及应用
Establishment and Application of A Detection Method for MSTN Gene-Edited Pigs Based on RPA-CRISPR/Cas12a
摘要旨在建立一种基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)和成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR 相关蛋白 12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associ-ated protein 12a,CRISPR/Cas12a)系统的MSTN基因编辑猪检测方法,以满足基因编辑动物研发、育种等过程中核酸检测以及基因型鉴定的需求.本研究构建含有猪MSTN基因突变序列和野生型序列的标准质粒并设计靶向标准质粒的crRNA,基于RPA和CRISPR/Cas12a技术建立荧光报告和胶体金试纸条检测体系,筛选特异性识别标准质粒的crRNA、优化其反应条件并评价其检测灵敏度,最后通过检测猪耳组织样品评价本方法的准确性和稳定性.研究结果表明,该方法能够特异性识别MSTN基因2 bp碱基缺失序列和MSTN 基因野生型序列.荧光报告体系最低可检测到4.1×101 copies·μL-的标准质粒,胶体金试纸条体系最低可检测到4.1×103 copies·μL-1的标准质粒.通过对猪耳组织样本的检测,证明了该检测体系的准确性和可靠性.综上所述,本研究建立的MSTN基因编辑猪RPA-CRISPR/Cas12a检测方法具有操作简便、特异性和灵敏度高的特点,为MSTN基因编辑猪检测提供了重要技术支撑,具有广阔的应用前景.
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关键词
MSTN基因编辑猪重组酶聚合酶扩增核酸检测CRISPR/Cas12aMSTN gene-edited pigrecombinase polymerase amplificationnucleic acid detectionCRISPR/Cas12a
分类号
S828.2
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2025.08.016
发布时间
2025-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技重大专项（2022ZD04020）
中国农业科学院科技创新工程（ASTIP-IAS05）
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