换一批猪流行性腹泻病毒荧光微球免疫层析抗原检测方法的建立
Establishment of Fluorescent Microsphere Immunochromatographic Assay for Porcine Epidemic Diarrhea Virus Antigen Detection
摘要本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法,为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的临床快速检测提供技术支持.本研究采用双抗体夹心法,结合荧光微球免疫层析技术,以时间分辨荧光微球(time-resolved fluorescence nanoparticles,TRFNPs)标记PEDV鼠源多克隆抗体制备荧光探针,以PEDV N蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体分别作检测线(T线)和质控线(C线),组装成荧光微球免疫层析抗原检测试纸条.分别通过检测梯度稀释的培养PEDV病毒液、常见猪病病毒、模拟粪便样品和临床病料验证该方法的敏感度、特异性和临床适用性.结果显示:本方法灵敏度高,最低检测限达103.1 TCID50·mL-1,较商品化胶体金试纸条检测灵敏性提高至少10倍.且试纸条T/C值与病毒滴度呈现良好线性关系,可用于PEDV的定量检测.本方法操作简单、耗时短,检测时间为15 min.方法学验证显示,试纸条检测TGEV、PoRV、PDCoV、PRRSV、CSFV、ASFV时不发生交叉反应,特异性良好.试纸条的批内、批间变异系数均小于10％,重复性良好.50份临床样品的检测结果与国标RT-PCR方法总体符合率为96％,方法一致性高.本研究成功建立了基于TRFNPs的PEDV荧光微球免疫层析抗原检测方法,为临床中PEDV的快速检测提供了工具.
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关键词
猪流行性腹泻病毒N蛋白时间分辨荧光微球免疫层析法定量检测porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)nucleocapsid proteintime-resolved fluorescence nanoparticles(TRFNPs)fluorescent microsphere immunochromatographic assay(FMICA)quantitative detection
分类号
S852.659.6
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2025.09.035
发布时间
2025-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（32473007）
现代农业产业技术体系（CARS-35）
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