换一批产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原制备及其对小鼠的免疫原性评价
Preparation of Clostridium perfringens α Toxin-ferritin Nanoparticle Antigens and Evaluation of Its Immunogenicity in Mice
摘要本研究旨在制备产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原并评价其对小鼠的免疫原性.将带有D56G、H68G点突变和Spytag序列的α毒素全长基因和带有SpyCatcher序列的铁蛋白(Ferritin)基因片段分别克隆至原核表达载体pET 28a,后进行表达并对表达产物进行鉴定和纯化.对纯化后的αm2ST进行细胞毒性、卵磷脂酶活性以及溶血活性分析.将纯化的αm2ST和FeSC在体外对接,随后,将α毒素-铁蛋白(αm2-Fe)对接产物和αm2ST分别与佐剂混合后免疫小鼠.免疫后每周采集小鼠血清,检测IgG、IgG亚型抗体水平和中和效价,并在二免后28 d取脾细胞分析T细胞亚群和IFN-γ分泌水平.结果显示,在28 ℃条件下,αm2ST和FeSC均以可溶性表达为主.αm2ST未被检测出细胞毒性、卵磷脂酶活性和溶血活性,这说明αm2ST已无毒性.将αm2ST和FeSC体外对接后,经SDS-PAGE、TEM和DLS分析,证实αm2-Fe形成直径32.7～50.7 nm的纳米颗粒,主峰为37.8 nm.小鼠免疫后,αm2-Fe组能产生较高水平的IgG2a抗体(P＜0.001);小鼠二免后21 d,αm2-Fe组血清中和效价为64倍,显著高于αm2ST组的32倍(P＜0.05);二免后28 d,αm2-Fe组脾细胞刺激后上清中的IFN-γ也高于αm2ST组(P＜0.05),流式细胞术分析显示αm2-Fe组产生了较高比例的效应性CD8+T细胞(P＜0.000 1).小鼠试验证实αm2-Fe纳米颗粒抗原能有效刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫.
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分类号
S852.616.3
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2025.09.040
发布时间
2025-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
宁夏重点研发项目（2024BBF02014）
中国农科院创新工程重点项目（CAAS-CSLPDCP-202403）
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