lncRNA663调控CLDN10表达及猪流行性腹泻病毒复制的功能分析
Functional Analysis of lncRNA663 Regulating CLDN10 Expression and Porcine Epidemic Diarrhea Virus Replication
摘要猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种引起仔猪急性腹泻、呕吐及脱水等临床症状的冠状病毒,对全球猪养殖业造成了严重的经济损失.越来越多的研究报道长链非编码RNA(lncRNA)在猪冠状病毒中发挥着重要的调控作用,然而,关于lncRNA663在PEDV感染中的调控作用和机制研究尚未有相关报道.基于前期高通量转录组数据分析,笔者发现lncRNA 663与紧密连接蛋白CLDN10具有共表达趋势,因此本研究以lncRNA 663和CLDN10为试验对象,探索其在PEDV感染中的调控作用.本研究qRT-PCR和Western blot结果显示,PEDV感染IPEC-J2细胞后上调了lncRNA 663和CLDN10的表达水平(P<0.05),DSS处理则显著降低了lncRNA 663 和CLDN10 的表达水平(P<0.05).亚细胞定位预测发现lncRNA 663 主要定位于细胞质,RPISeq预测发现lncRNA663 和CLDN10 高度互作(SVM:0.98,RF:0.8);功能试验结果显示,siRNAs敲低lncRNA 663后,CLDN10的mRNA和蛋白表达水平显著下降,PEDV复制水平亦同步降低(P<0.05).进一步通过AlphaFold3和ChimeraX进行结构预测,发现CLDN10可能与PEDV S蛋白形成7个氢键结合位点,提示其可能参与病毒侵染过程.综上所述,本研究初步揭示lncRNA 663通过调控CLDN10表达促进PEDV复制的可能机制,为深入解析病毒与宿主非编码RNA互作关系及干预靶点提供参考.
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