旋毛虫核激素受体NHR-23克隆表达和特性分析
Cloning,Expression and Characterization of Trichinella spiralis Nuclear Hormone Receptor NHR-23
摘要本文旨在评估旋毛虫核激素受体-23(NHR-23)的生物学特性及其疫苗开发潜力.通过克隆表达得到纯化的重组TsNHR-23蛋白(rTsNHR-23),Western blot分析其反应原性,qPCR分析TsNHR-23基因在旋毛虫不同发育阶段的转录水平.体外试验利用抗rTsNHR-23多克隆抗体分析对肌肉幼虫蜕皮的抑制,并探究该蛋白对小鼠巨噬细胞炎性细胞因子分泌的影响.将PLGA纳米颗粒包被的rTsNHR-23蛋白免疫ICR小鼠,通过检测小鼠血清中IgG抗体水平的变化、细胞因子IGF-1、IL-6和TGF-β的变化并计算减虫率,评估rTsNHR-23蛋白的免疫保护效果.结果表明,TsNHR-23基因在旋毛虫的不同发育阶段均存在转录,且在肌肉幼虫阶段的转录水平最高.抗rTsNHR-23的多克隆抗体能够显著降低肌肉幼虫的蜕皮率,也可有效抑制蜕皮进程的发展.rTsNHR-23蛋白能够显著提高小鼠巨噬细胞IL-1β、IL-6、IL-10的转录水平.免疫保护试验显示rTs-NHR-23蛋白免疫小鼠后,与对照组相比,小鼠血清中IgG抗体水平极显著升高,首次免疫后IGF-1显著下降,IL-6及TGF-β升高;二次免疫后,IGF-1部分回升,TGF-β则显著下调.攻虫后,与对照组相比,小鼠体内旋毛虫成虫数量、平均每条雌虫产生的新生幼虫数量以及肌肉幼虫数量均显著下降.综上所述,旋毛虫重组NHR-23蛋白对肌肉幼虫的蜕皮具有显著抑制作用,将该蛋白免疫小鼠后,荷虫量显著下降,具有作为疫苗候选抗原的潜力.
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