基于母猪VBP1,CpG_280和CpG_1360靶标DNA甲基化的妊娠检测技术建立
Establishment of A Pregnancy Detection Technique Based on DNA Methylation of VBP1,CpG_280,and CpG_1360 Genes in Sows
摘要旨在筛选母猪妊娠相关差异甲基化基因,建立基于甲基化荧光探针早孕检测技术.本研究重点关注基因启动子和CpG岛差异甲基化区域,筛选潜在的猪妊娠靶标.首先利用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)对基因差异甲基化区域进行初步验证,进一步设计靶标荧光探针,建立基于甲基化荧光探针(quantitative methylation-specific PCR,qMSP)早孕检测技术方法并进行验证.试验数据显示,发现相比于空怀母猪,妊娠25~30天母猪血液中VBP1和CpG_280呈现高甲基化状态,而CpG_1360表现为低甲基化,表明这些位点可能参与妊娠调控.以猪β-actin为内参探针,设计VBP1、CpG_280和CpG_1360甲基化探针,建立qMSP检测方法并初步应用.对靶标基因甲基化探针检测技术与B超检测符合率进行分析,VBP1、CpG_280和CpG_1360的受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)下的面积(area under curve,AUC)分别为0.713 8、0.608 0 和 0.746 6,均大于 0.5,基于VBP1、CpG_280 和CpG_1360 的qMSP检测技术符合率分别为 85.0%、78.75%和85.0%,AUC值大于0.5说明该检测技术具有诊断价值.本研究证实在母猪妊娠早期其血液中VBP1和CpG_280为高甲基化而CpG_1360为低甲基化,基于靶标基因的甲基化荧光探针检测技术可作为一种早期诊断猪妊娠的新方法.
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