摘要旨在测定产后健康奶牛与亚临床型酮病奶牛血液糖与脂代谢、免疫及氧化抗氧化相关指标的昼夜变化规律及其差异,从昼夜节律生物钟的角度评估酮病对奶牛能量代谢、免疫及氧化应激等相关机能昼夜变化生理稳态的影响.试验采集不同时间点(09:00、17:00和01:00)产后健康组(产后3～21 d,血液BHBA<1.2 mmol·L-1,n=10)和亚临床型酮病组奶牛(产后 3～21 d,1.2 mmol·L-1<血液BHBA<3.0 mmol·L-1,n=10)的血液样品,使用血酮血糖测定仪、胆固醇测定试剂盒测定各组奶牛糖与脂代谢指标的昼夜变化,分离血液中的白细胞并提取RNA,借助实时荧光定量PCR技术检测血液白细胞中炎症相关基因和生物钟基因的昼夜变化规律,使用ELISA试剂盒检测血液氧化应激指标变化.结果发现,与健康组相比,亚临床型酮病组奶牛血液β-羟基丁酸(BHBA)含量显著升高(P<0.000 1),血液葡萄糖浓度(P<0.01)和血浆胆固醇含量(P<0.000 1)显著下降,且亚临床型酮病组奶牛血液葡萄糖含量(P<0.05)具有显著的昼夜差异;健康组奶牛血浆中过氧化氢(H2O2)(P<0.05)、过氧化氢酶(CAT)(P<0.05)、超氧化物歧化酶(SOD)(P<0.05)与β-N-乙酰胺葡萄糖苷酶(NAG)(P<0.05)等指标变化均具有显著的昼夜差异;亚临床型酮病组血浆H2O2(P<0.05)与CAT(P<0.01)指标变化具有显著昼夜差异;与健康组相比,亚临床型酮病组奶牛血浆中H2O2(P<0.01)和丙二醛(MDA)(P<0.000 1)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)(P<0.05)与NAG(P<0.000 1)活性均显著升高.qPCR结果显示,健康组奶牛血液白细胞中生物钟基因BMAL1(P<0.01)、RORα(P<0.05)和PER2(P<0.01)mRNA的表达均具有显著的昼夜差异,亚临床型酮病组奶牛血液白细胞中生物钟基因BMAL1(P<0.05)、NR1D1(P<0.05)、RORα(P<0.01)与PER2(P<0.05)mRNA的表达均具有显著的昼夜差异;与健康组相比,亚临床型酮病组奶牛血液白细胞中BMAL1(P<0.05)、RORα(P<0.01)与PER2(P<0.01)mRNA的昼夜表达模式发生显著改变;健康组奶牛血液白细胞中炎性因子白细胞介素-6(IL-6)(P<0.000 1)、白细胞介素-8(IL-8)(P<0.05)、白细胞介素-10(IL-10)(P<0.05)、白细胞介素-1β(IL-1β)(P<0.01)和趋化因子配体5(CCL5)(P<0.01)mRNA的表达均具有显著的昼夜差异,亚临床型酮病组奶牛血液白细胞中的IL-6(P<0.01)、IL-10(P<0.01)、IL-1β(P<0.000 1)mRNA的表达具有显著昼夜差异;与健康组相比,亚临床型酮病组奶牛血液白细胞中IL-6、IL-10、IL-1β mRNA的昼夜表达模式发生改变,IL-8和CCL5 mRNA表达的昼夜差异消失.综上所述,健康奶牛与亚临床型酮病奶牛部分血液糖脂代谢指标、氧化应激指标、血液白细胞生物钟基因和炎症因子基因表达具有昼夜节律差异,但亚临床型酮病奶牛部分血液糖脂代谢指标、氧化应激指标、血液白细胞生物钟基因和炎症因子基因表达昼夜变化规律显著改变,血浆氧化与抗氧化系统的昼夜变化稳态失常,血液白细胞中生物钟基因和炎症相关基因表达的昼夜变化规律异常,酮病伴随的机体抵抗力下降可能与奶牛外周血白细胞中炎症因子表达的昼夜变化节律异常有关.上述研究从昼夜节律生物钟角度初步解析了酮病奶牛血液指标的特征性变化,为奶牛酮病的精准防控与精准诊断提供了研究基础和理论依据.