换一批猪繁殖与呼吸综合征病毒基因2型实时荧光RT-PCR盔甲RNA阳性质控品的构建
Construction of an Armored RNA Positive Control for Real-time RT-PCR Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Genotype 2
摘要本研究旨在利用MS2噬菌体外壳蛋白自组装并包封外源核酸的特性,制备用于猪繁殖与呼吸综合征病毒基因 2型(porcine reproductive and respiratory syndrome virus genotype 2,PRRSV-2)RT-qPCR 检测阳性质控品,并探究其稳定性及耐RNase特性.选取PRRSV-2的特异性靶基因(ORF7保守区),插入pET28a(+)/CP-A重组质粒PAC位点下游构建重组载体,经原核表达、硫酸铵沉淀及凝胶过滤层析纯化,获得20～28 nm均一的MS2病毒样颗粒;通过全能核酸酶消化及RT-qPCR,验证其热稳定性和抗RNase能力.结果显示:成功构建含MS2噬菌体外壳蛋白、PAC位点和PRRSV-2靶基因的重组载体,纯化后形成包封靶基因的盔甲RNA,可耐受RNase降解,37℃无菌条件下稳定存在7 d.该盔甲RNA可作为PRRSV-2 RT-qPCR阳性质控品,相比传统合成核酸,优势在于:1)模拟真实病毒核酸状态,监控全检测流程;2)耐RNase能力强;3)3批次批内及批间变异系数均<2％;4)37℃稳定保存7 d,为PRRSV-2检测提供可靠质控工具.
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒基因2型盔甲RNA实时荧光RT-PCR质控品病毒样颗粒MS2 噬菌体porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)genotype 2armored RNAreal-time RT-PCRquality control productvirus-like particles(VLPs)MS2 bacteriophage
分类号
S852.659.6
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2026.03.049
发布时间
2026-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
天津市科技计划项目（24ZYCGSN01410）
天津市生猪产业技术体系创新团队猪重大疫病监测与预警岗位项目（ITTPRS2021004）
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