circLMO7靶向miR-145-5p影响IGF1R/AKT信号通路促进猪骨骼肌卫星细胞增殖与分化
circLMO7 Promotes Porcine Skeletal Muscle Satellite Cells Proliferation and Differentiation via Binding miR-145-5p to Affecting IGF1R/AKT Signaling Pathway
摘要旨在鉴定参与猪骨骼肌生长发育的circLMO7并研究其作用和分子机制.本研究选用1 d晋汾白猪趾长伸肌进行骨骼肌卫星细胞的分离与培养;经Sanger测序、RNase R和放线菌素D处理验证其环状特性;过表达和干扰circLMO7后(每个处理3个重复),利用qPCR、Western blot、EdU、CCK-8、细胞周期分析和免疫荧光检测其在猪骨骼肌卫星细胞增殖和分化中的功能;通过双荧光素酶报告基因试验和挽救试验验证circLMO7与miR-145-5p的靶向关系,揭示其可能通过miR-145-5p/IGF1R/AKT信号通路调控细胞增殖与分化.结果表明,基于晋汾白猪背最长肌转录组测序数据中鉴定出一种新的circRNA,命名为circLMO7.其由LMO7基因的第3、10和11外显子转录而来,在晋汾白猪大多数组织中均有表达,且在肺中表达量较高.在骨骼肌卫星细胞(SMSCs)的分化过程中,circLMO7的表达量呈现先下降后上升的趋势.此外,过表达circLMO7能够促进猪SMSCs的增殖与分化,而干扰结果相反.双荧光素酶报告基因检测和挽救试验结果表明,circLMO7可能作为ceRNA通过靶向miR-145-5p调控IGF1R的表达进而影响AKT信号通路,促进猪SMSCs的增殖和分化.综上,circLMO7能缓解miR-145-5p对IGF1R/AKT通路的抑制作用,促进猪SMSCs的增殖与分化,进而参与骨骼肌的发育过程.
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