换一批猪丁型冠状病毒S蛋白棕榈酰化突变毒株的构建及免疫原性分析
Construction and Immunogenicity Evaluation of a Palmitoylation-Mutated Porcine Deltacoronavirus Strain with Spike Protein Modification
摘要猪丁型冠状病毒(PDCoV)是一种新型肠道冠状病毒,主要感染哺乳仔猪,临床表现为呕吐、腹泻、脱水等症状.为了解PDCoV S蛋白上的棕榈酰化位点对其复制性和免疫原性的影响.用CSS Palm 4.0预测了 S蛋白的棕榈酰化位点,棕榈酰化抑制剂2-溴棕榈酸(2-BP)处理进行验证;在rPDCoV-CHN-HN-2014质粒载体上使用CRISPR/Cas9技术构建突变棕榈酰化位点的重组毒株,通过病毒增殖曲线了解毒株的生长动力学差异,将病毒制备灭活疫苗,免疫小鼠,用中和试验和间接ELISA检测小鼠血清的特异性抗体水平.结果表明:PDCoV S蛋白有8个棕榈酰化位点;成功拯救了 rPDCoV-S-C12S和rPDCoV-S-C1131S重组毒株,生长动力学差异显示所有毒株在宿主细胞内的感染效价均呈现先增后降态势,rPDCoV-S-C12S在24 h达到感染滴度峰值,rPDCoV-CHN-HN-2014和rPDCoV-S-C1131S均在36 h达到感染滴度峰值;血清中和试验中,rPDCoV-CHN-HN-2014、rPDCoV-S-C12S和rPDCoV-S-C1131S诱导的中和效价达1∶64;间接ELISA检测到小鼠血清IgG抗体水平,各组之间无显著差异.该研究可为进一步探究PDCoV的致病机制和开发基因缺失株疫苗提供理论基础和数据支持.
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关键词
猪丁型冠状病毒S蛋白棕榈酰化CRISPR/Cas9免疫原性porcine deltacoronavirusS proteinpalmitoylationCRISPR/Cas9immunogenicity
分类号
S852.659.6
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2026.05.034
发布时间
2026-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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