换一批
换一批摘要旨在使用转座子插入突变方法构建牛支原体08M株的突变体文库,为毒力相关基因的鉴定提供技术平台.测定了牛支原体08M株的浓度(颜色变化单位,CCU)和庆大霉素最低抑菌浓度(MIC).应用电穿孔方法,将庆大霉素抗性质粒pISM2062(携带有转座子Tn4001 mod)导入牛支原体08M株感受态细胞内,经抗性平板筛选、液体培养及PCR鉴定,构建08M株的突变体文库.随机挑选10个克隆菌株传10代检测转座子稳定性,挑选2个克隆用Southern blot检测转座子是否存在多次插入.结果显示:08M株浓度为1.13× 107 CCU/mL,庆大霉素MIC为16 ng/μL;电转化pISM2062的牛支原体08M株在抗性平板形成菌落445个,从中克隆培养成功380个,PCR鉴定结果显示存在Tn插入的菌株有263个,阳性率为69.21％ (263/380);插入的转座子稳定传代,且无多次插入.本研究成功初步构建了牛支原体08M株的转座子插入突变体文库.
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