换一批BAG4过表达重组质粒构建及转染结肠癌SW480细胞的鉴定
Construction of Recombinant BAG4 Overexpressed Plasmids and Validation of Their Transfection to SW480 Colon Cancer Cells
摘要目的 构建BAG4(Bcl-2-associated athanogene)基因过表达重组质粒,转染结肠癌细胞株,并对其是否转染成功进行鉴定.方法 Real-time聚合酶链反应(PCR)检测和筛选6株结肠癌细胞BAG4mRNA表达.采用全基因合成法合成BAG4编码区序列,克隆入pEGFP-C1载体末端,构建重组质粒pEGFP-Cl-BAG4并DNA测序,以500ul脂质体质粒复合物瞬时转染SW480细胞,Western blot(鼠抗人BAG4单抗1:500)、RT-PCR等检测目的基因表达效率.结果 6株细胞中,HT29和SW480细胞BAG4 mRNA及蛋白水平最低.测序结果表明BAG4重组质粒构建成功.瞬时转染SW480细胞后,BAG4 mRNA分别升高约100倍,并BAG4蛋白表达也明显升高.结论 成功构建BAG4基因过表达重组质粒,并有较高的转染水平,为进一步的研究提供了条件.
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