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梨ISSR-PCR反应体系的正交优化研究

On Optimization of Reaction System in Pear-Using Orthogonal Design

摘要以‘饼子梨’为试材,利用正交设计L16(45)研究了反应体系中引物、模板DNA浓度等5个因素4个水平对梨反应体系的影响,PCR结果应用极差分析和MINITAB软件对扩增结果进行方差分析.梨最佳ISSR‐PCR反应体系:25μL反应体系中含2.5μL 10× Buffer ,2.0 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTPs ,0.25μmol/L引物,60 ng模板DNA ,0.75 U Taq DNA聚合酶.优化的ISSR‐PCR反应体系稳定性高和重复性较好,为梨品种指纹图谱构建和遗传多样性分析奠定基础.

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