换一批基于酵母双杂交的PPP2R3A相互作用蛋白图谱构建与鉴定研究
Construction and Identification of PPP2R3A Interacting Protein Map Based on Yeast Two-hybrid
摘要目的 构建并鉴定蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)调节蛋白磷酸酶2调节亚基B''alpha(protein phosphatase 2 regulatory subunit B''-α,PPP2R3A)的相互作用蛋白图谱,以探索PPP2R3A在心肌细胞中的作用机制.方法 首先构建人类原代心肌细胞的cDNA文库,并通过质粒转化技术进行验证.然后,采用酵母双杂交技术,以PPP2R3A为诱饵,筛选出与之相互作用的蛋白.最后,对筛选出的相互作用蛋白进行功能分类与分析.结果 研究成功构建人类原代心肌细胞的cDNA文库,重组效率达到100%,滴度为1.2×107 CFU/mL,cDNA片段长度大部分超过 1 200 bp,保证了心肌细胞基因表达的广泛覆盖.研究成功鉴定出 19 种与PPP2R3A相互作用的蛋白,包括GIPC1、AXIN1、RGS19、COL1A2、MYO15B、Vimentin、RBM10、EWSR1、BCL6、PBXIP1、HTRA1和KAT5等.其中COL1A2的筛选频率最高,为12.5%.回转验证实验表明,这些相互作用蛋白能够激活His、Ade和LacZ报告基因,进一步确认了它们与PPP2R3A的相互作用.结论 PPP2R3A通过与多种蛋白的相互作用,参与了心肌细胞的多条生物学途径,揭示了其在心脏生理与病理过程中复杂的调控网络,为心血管疾病的靶向治疗提供了新的研究思路和潜在的治疗靶点.
更多相关知识
关键词
PPP2R3A蛋白磷酸酶2AcDNA文库酵母双杂交蛋白相互作用PPP2R3AProtein phosphatase 2AcDNA libraryYeast two-hybridProtein interaction
分类号
R4（临床医学）
栏目名称
DOI
10.19368/j.cnki.2096-1782.2025.12.001
发布时间
2025-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81460064）
云南省基础研究计划项目（202301AT070236）
云南省高层次人才培养支持计划（YNWR-QNBJ-2020-261）
云南省应用基础研究昆医联合专项（2014FB034）
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