人绒毛膜促性腺激素对反复种植失败不孕患者子宫内膜容受性的影响

Effect of human chorionic gonadotropin on endometrial receptivity of infertile patients with repeated implantation failure

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摘要目的探讨人绒毛膜促性腺激素(HCG)对反复种植失败(RIF)不孕患者子宫内膜容受性的影响.方法收集2015 年 1 月至2022 年 12 月在河南省人民医院行辅助生殖助孕的 20 例RIF患者月经第 14 天的子宫内膜组织,分离培养获得40 份子宫内膜细胞,同时复苏解冻40 枚相同时间段行辅助生殖助孕并成功分娩、已无生育需求患者的实验室冻存废弃胚胎,构建40 个子宫内膜和胚胎体外共培养模型,然后将体外共培养模型分为子宫内膜-胚胎-HCG共培养组(试验组)和子宫内膜-胚胎共培养组(对照组),置于培养箱中培养.培养第 1 天(D1),试验组加入1 mg·L-1 的HCG 1 mL,对照组加入 1mL含 1 mg·L-1 雌激素(E2)和 10 mg·L-1 孕激素(P)的子宫内膜细胞培养液,连续培养7d.收集培养D1、第3 天(D3)、第5 天(D5)、第7 天(D7)试验组和对照组培养液各 1 mL,-20℃冻存.另于培养D7 收集试验组培养液 5 mL,分为阴性未干预组、1 mg·L-1 HCG组、2 mg·L-1 HCG组、4 mg·L-1 HCG组、5 mg·L-1 HCG组,分别加入0、1、2、4、5 mg·L-1 HCG各 1 mL;同时,收集对照组培养液5 mL,分为阴性未干预组、1 mg·L-1 E2+10 mg·L-1 P组、2 mg·L-1 E2+20 mg·L-1 P组、4 mg·L-1 E2+40 mg·L-1 P组、5 mg·L-1 E2+50 mg·L-1 P组,加入分别含0、1、2、4、5 mg·L-1 E2 和 0、10、20、40、50 mg·L-1 P的子宫内膜细胞培养液各 1 mL;继续培养 1 d后,收集试验组各组及对照组各组培养液各 1 mL,-20℃冻存.取D1、D3、D5、D7 的试验组和对照组冻存培养液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养液中白血病抑制因子(LIF)水平,Western blot法检测培养液中LIF蛋白相对表达量.取不同浓度HCG或E2、P干预后试验组和对照组冻存培养液,采用ELISA法检测培养液中LIF水平,Western blot法检测培养液中LIF蛋白相对表达量.结果 D1、D3、D5、D7 时,试验组培养液中LIF水平均高于对照组(P＜0.05).试验组和对照组D3、D5、D7 时培养液中LIF水平均高于D1 时(P＜0.05),D5、D7 时培养液中LIF水平均高于D3 时(P＜0.05),D7 时培养液中LIF水平均高于D5 时(P＜0.05).D1、D3、D5、D7 时,试验组培养液中LIF蛋白相对表达量均高于对照组(P＜0.05).试验组和对照组D3、D5、D7 时培养液中LIF蛋白相对表达量均高于D1 时(P＜0.05),D5、D7 时培养液中LIF蛋白相对表达量均高于D3 时(P＜0.05),D7 时培养液中LIF蛋白相对表达量均高于D5 时(P＜0.05).对照组阴性未干预组、1 mg·L-1 E2+10 mg·L-1 P 组、2 mg·L-1 E2+20 mg·L-1 P 组、4 mg·L-1 E2+40 mg·L-1 P组、5 mg·L-1 E2+50 mg·L-1 P组各组之间培养液中LIF水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).试验组 1 mg·L-1 HCG组、2 mg·L-1 HCG组、4 mg·L-1 HCG组、5 mg·L-1 HCG组培养液中LIF水平高于阴性未干预组(P＜0.05),2 mg·L-1 HCG组、4 mg·L-1 HCG组、5 mg·L-1 HCG组培养液中LIF 水平高于1 mg·L-1 HCG组(P＜0.05),4 mg·L-1 HCG组、5 mg·L-1 HCG组培养液中LIF水平高于2 mg·L-1 HCG组(P＜0.05),5 mg·L-1 HCG组培养液中LIF水平高于4 mg·L-1 HCG组(P＜0.05).试验组阴性未干预组培养液中LIF水平高于对照组阴性未干预组(P＜0.05),1 mg·L-1 HCG组培养液中LIF水平高于 1 mg·L-1 E2+10 mg·L-1 P组(P＜0.05),2 mg·L-1 HCG组培养液中LIF水平高于2 mg·L-1 E2+20 mg·L-1 P组(P＜0.05),4 mg·L-1 HCG组培养液中LIF水平高于4 mg·L-1 E2+40 mg·L-1 P组(P＜0.05),5 mg·L-1 HCG组培养液中LIF水平高于 5 mg·L-1 E2+50 mg·L-1 P组(P＜0.05).对照组阴性未干预组、1 mg·L-1 E2+10 mg·L-1 P组、2 mg·L-1 E2+20 mg·L-1 P组、4 mg·L-1 E2+40 mg·L-1 P组、5 mg·L-1 E2+50 mg·L-1 P组各组之间培养液中LIF蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P＞0.05).试验组 1 mg·L-1 HCG组、2 mg·L-1 HCG组、4 mg·L-1 HCG组、5 mg·L-1 HCG组培养液中LIF蛋白相对表达量高于阴性未干预组(P＜0.05),2 mg·L-1 HCG组、4 mg·L-1 HCG组、5 mg·L-1 HCG组培养液中LIF蛋白相对表达量高于 1 mg·L-1 HCG组(P＜0.05),4 mg·L-1 HCG组、5 mg·L-1 HCG组培养液中LIF蛋白相对表达量高于2 mg·L-1 HCG组(P＜0.05),5 mg·L-1 HCG组培养液中LIF蛋白相对表达量高于4 mg·L-1 HCG组(P＜0.05).试验组阴性未干预组培养液中LIF蛋白相对表达量高于对照组阴性未干预组(P＜0.05),1 mg·L-1 HCG组培养液中LIF蛋白相对表达量高于 1 mg·L-1 E2+10 mg·L-1 P组(P＜0.05),2 mg·L-1 HCG组培养液中LIF蛋白相对表达量高于2 mg·L-1 E2+20 mg·L-1 P组(P＜0.05),4 mg·L-1 HCG组培养液中LIF蛋白相对表达量高于4 mg·L-1 E2+40 mg·L-1 P组(P＜0.05),5 mg·L-1 HCG组培养液中LIF蛋白相对表达量显著高于5 mg·L-1 E2+50 mg·L-1 P组(P＜0.05).结论在体外共培养条件下,HCG能够促进RIF患者子宫内膜中LIF的分泌和表达,提高RIF患者的子宫内膜容受性.