摘要目的 筛选并构建表达一种新型抗胰岛素样生长因子(IGF)-1/IGF-2单链抗体(scFv),检测其对食管鳞状细胞癌的体内外抗肿瘤活性.方法 以IGF-1和IGF-2为抗原从噬菌体展示单链抗体库中筛选出一株新型抗IGF-1/IGF-2 scFv,将其在大肠杆菌中诱导表达和分离纯化.酶联免疫吸附法检测抗IGF-1/IGF-2 scFv与抗原的亲和活性,噻唑蓝法检测抗IGF-1/IGF-2 scFv对食管癌细胞的增殖抑制活性,Western blot检测胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B(AKT)及其磷酸化水平,在裸鼠移植瘤模型中检测抗IGF-1/IGF-2 scFv体内抗肿瘤活性.结果 经过7轮筛选得到了对IGF-1/IGF-2具有高亲和力的单链抗体抗IGF-1/IGF-2 scFv,该克隆基因长768 bp,编码256个氨基酸;重链可变区和轻链可变区同源序列均为人IgG可变区基因,具有3个互视决定R区和4个抗体骨架区,是一个全新的蛋白.抗IGF-1/IGF-2 scFv可在大肠杆菌中大量表达,复性后的scFv蛋白纯度超过90％;纯化出的蛋白可被抗His-tag抗体所识别;每升发酵液可获得59.53 mg的scFv蛋白.抗IGF-1/IGF-2 scFv与人IGF-1、IGF-2 和胰岛素的亲和常数分别为 7.387、9.437、24.470 mg·L-1.抗 IGF-1/IGF-2 scFv 对 KYSE150、KYSE450和EC9706细胞的半数抑制浓度分别为1.06 ×10-5、4.49 ×10-6、1.6×10-6 mol·L-1.抗I GF-1/IGF-2 scFv处理可显著抑制IGF-1 R及其下游2个主要信号分子AKT和ERK的活化(P＜0.05).抗IGF-1/IGF-2 scFv在10、30、60 mg·kg-1剂量下,对KYSE150裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为45.1％、58.9％和68.8％.结论 筛选得到单链抗体抗IGF-1/IGF-2 scFv,该单链抗体对食管鳞状细胞癌有一定的抗肿瘤活性,具有开发成为食管鳞状细胞癌分子靶向药物的应用潜能.