细胞周期蛋白依赖激酶对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

Influences of cyclin dependent kinase on proliferation and apoptosis in hepatic carcinoma cells

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摘要目的:探讨细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin dependent kinase,CDK)对原发性肝癌(肝癌)细胞增殖及凋亡的影响.方法:对体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721分别予浓度为0 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L、8 μmol/L、16 μmol/L、32 μmol/L CDK 抑制剂roscovitine干预72 h,分别通过倒置显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪、逆转录PCR法观察SMMC-7721细胞的生长、增殖,细胞周期时相的分布、凋亡以及CDK2、半胱氨酸蛋白酶-3和BCL-2 mRNA的表达.结果:予roscovitine 干预72 h后,光镜下可见随着roscovitine浓度的增加,部分细胞核固缩、胞体折光性减弱、胞浆内可见有颗粒和核碎片形成,其中以32 μmol/L组的改变最为明显.四甲基偶氮唑蓝法结果显示,不同浓度的roscovitine对细胞生长均有一定的抑制作用, roscovitine对细胞的抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性.流式细胞仪检测发现,经roscovitine干预后肝癌细胞 G0期、G1期及凋亡细胞的比例增加.逆转录PCR发现,随着roscovitine浓度的增加,CDK2 mRNA及凋亡相关基因BCL-2 mRNA水平降低,半胱氨酸蛋白酶-3 mRNA表达升高.结论:CDK表达降低可抑制增殖期肝癌细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,凋亡机制可能与BCL-2、半胱氨酸蛋白酶-3的表达改变有关.CDK在肝癌细胞增殖及凋亡中起着重要作用.