稳定过表达IL-9的小鼠CT-26肿瘤细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型的建立

Establishment of the CT-26 cell lines stably over-expressing IL-9 gene and BALB/C mouse models of subcutaneous xenograft

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摘要目的建立稳定过表达IL-9的小鼠CT-26肿瘤细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型,为后续研究IL-9在结肠癌肿瘤微环境中的作用及其机制提供实验基础.方法将目的基因IL-9片段插入带有绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体GV492,构建重组过表达IL-9-GV492质粒,转染293T细胞后,用倒置荧光显微镜观察GFP的表达强度,用蛋白免疫印迹法检测IL-9的表达;包装病毒后检测病毒滴度.将过表达IL-9的慢病毒转染小鼠结肠癌CT-26细胞后,用倒置荧光显微镜观察GFP的表达强度,用流式细胞仪检测GFP及IL-9的表达,用qRT-PCR法检测IL-9的mRNA表达.过表达IL-9的CT-26细胞皮下接种BALB/C小鼠建立皮下移植瘤模型后,用免疫组化法检测肿瘤中IL-9的蛋白表达,用qRT-PCR法检测IL-9的mRNA表达.结果阳性重组质粒PCR扩增产物大小约617 bp,DNA测序显示重组质粒的编码序列与目标序列完全一致.293T细胞自身不表达IL-9,重组质粒转染293T细胞后表达IL-9;慢病毒滴度为2×109 TU/ml.慢病毒转染小鼠结肠癌CT-26细胞后,Control组、LV-NC组、LV-IL-9组GFP表达阳性率分别为0、96.4％、91.2％;LV-IL-9组IL-9的MFI及mRNA的表达均高于LV-NC组(P均<0.05).BALB/C小鼠皮下移植瘤模型建立后,实验组小鼠肿瘤IL-9的阳性表达率及mRNA的表达均高于阴性对照组(P均<0.05).结论稳定过表达IL-9的小鼠结肠癌CT-26细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型建立成功.