骨髓间充质干细胞接种小鼠肝癌组织对小鼠生存期的影响
Impact of inoculation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells into hepatocellular carcinoma tissue on survival time in mice with orthotopic hepatocellular carcinoma
摘要目的 研究骨髓间充质干细胞(MSC)接种于原发性肝癌Heps荷瘤小鼠对其生存期的影响.方法 体外贴壁培养法制备昆明小鼠骨髓MSC,分离培养传代扩增,流式细胞仪鉴定MSC表型.4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)对MSC进行标记备用.随机取54只8周龄昆明小鼠,建立Heps肝癌移植瘤模型.移植瘤长径达0.5~0.8 cm时,随机分为MSC组、DAPI标记MSC组(DAPI组)、生理盐水(NS)对照组(NS对照组),每组18只.MSC组及DAPI组分别在小鼠Heps肝癌移植瘤内注射2×106 MSC及DAPI标记的MSC,NS对照组注射同体积的NS.每组各有6只荷瘤小鼠用于观察生存期.①自注射日起,隔日测量各组小鼠肿瘤长、短径,计算注射后3、7、14及28天的肿瘤体积;②记录注射当天开始至小鼠死亡的时间,计算各组小鼠平均生存时间;③于注射后3、7、14及28天,各组分批处死3只小鼠.取肿瘤组织,石蜡包埋并切片,苏木精-伊红染色后光学显微镜观察.结果 ①体外贴壁法成功制备MSC,流式细胞仪对第3代MSC进行鉴定,高表达CD29(97.84%),低表达CD34(5.56%)、CD45(7.66%).②小鼠Heps肝癌腹水瘤细胞成功制备小鼠Heps肝癌移植瘤模型,成瘤率100%.③注射MSC后1周,MSC组及DAPI组肿瘤体积增大明显,与NS对照组差异有显著性(P<0.05).④MSC组平均生存期为45天(95%可信区间:33~56天),DAPI组平均生存期为34天(95%可信区间:31~37天),NS对照组平均生存期为33天(95%可信区间:28~37天);MSC组与NS对照组差异有显著性(P<0.05),其余组间生存期差异无显著性(P>0.05).⑤各组小鼠肿瘤苏木精-伊红染色:28天时,MSC组及DAPI组肿瘤组织坏死明显,范围较NS对照组更大.结论 MSC可在原发性肝癌Heps荷瘤小鼠肿瘤组织内定植,MSC接种后1周内肿瘤增长迅速,小鼠生存期延长.
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