柱前衍生化结合气质联用同时测定糖尿病肾病大鼠血浆中18种氨基酸含量
Simultaneous determination of 18 amino acids in the plasma of diabetic nephropathy rats using pre-column derivation coupled with GC-MS
摘要目的 建立同时测定大鼠血浆中18种氨基酸的柱前衍生化结合气质联用(GC-MS)分析方法.方法 大鼠血浆用氯甲酸乙酯衍生化后进行GC-MS分析,条件如下:Agilent HP-5MS UI(60 m×0.25 mm ×0.25μm)柱为固定相;程序升温;进样口温度240℃;不分流模式进样;载气为高纯氦气,流速设为1.0 ml·min-1 .采用电子轰击离子源;选择离子临测模式;离子源温度230℃;电子能量70 eV;溶剂延迟时间5.45 min.结果 18种氨基酸得到较好分离,且在1.6 ~2 400 μmol·L-1范隔内其浓度与响应值具有良好的线性关系(r2>0.9985);批内及批间精密度(RSD)均小于10%;样品平均加样回收率及基质效应分别为72.17% ~ 111.4%和90.42%~114.6%;血浆室温放置8h、-80℃放置28天,血浆衍生化后4℃放置12h、-20℃放置24 h均稳定;和正常大鼠相比,除组氨酸和脯氨酸外,糖尿病大鼠血浆中其他16种氨基酸含量均发生了显著变化.结论 该方法简便易操作、准确度高、特异性好,而且该衍生化产物稳定、线性范围宽、基质效应小,可用于正常及糖尿病大鼠血浆中氨基酸的测定.
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