苯扎氯铵诱发小鼠角膜损伤模型的构建及损伤机制研究
Optimization of mouse corneal injury model using benzalkonium chloride and mechanical injuries of corneal epithelium
摘要目的 确定苯扎氯铵诱导小鼠角膜损伤模型的最适浓度,探索其损伤产生的相关分子机制.方法 C57BL/6雄性小鼠30只,适应性饲养1周,裂隙灯检查排除眼疾后随机分为对照组、苯扎氯铵组(浓度:0.2%、0.4%、0.6%、0.8%),每组6只鼠12只眼,对照组给予磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline,PBS),除对照组外,其他组连续给予对应浓度苯扎氯铵7 d后进行泪液分泌试验(schirmer I test,SIT),在裂隙灯下进行角膜浑浊度、角膜新生血管和荧光素染色评分.安乐死小鼠后取眼球并制备石蜡组织切片进行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)和过典酸雪夫氏染色(periodic acid-schiff staining,PAS);Western bolt检测单核细胞趋化蛋白 1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)表达评估炎症水平,检测细胞色素C(cytochrome C)表达评估凋亡水平.结果 与对照组相比,0.4%及以上浓度苯扎氯铵可导致小鼠泪液分泌量下降,角膜浑浊度和新生血管水平增加.HE染色结果证实0.4%及以上浓度苯扎氯铵处理后角膜上皮层变薄且细胞排列不规则,其基质层炎症细胞浸润明显.PAS染色显示0.4%及以上浓度苯扎氯铵处理可造成结膜杯状细胞数量降低,且呈浓度依赖性.MCP-1蛋白的表达随苯扎氯铵浓度的增加而升高,Cytochrome C的蛋白水平在0.4%苯扎氯铵组最高.结论 0.4%及以上浓度的苯扎氯铵可诱导小鼠严重的角膜损伤,且0.4%为最佳造模浓度,其损伤与炎症因子MCP-1以及凋亡因子Cytochrome C的表达增加有关.
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