pBR322-Red介导的E.coli染色体基因敲入、位点及表达研究

pBR322-Red Mediated Gene Knockin,Sites and Expression in E. coli Chromosome

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摘要应用pBR322-Red介导的重组工程系统,kan/sacB选择反选择系统,双链线性DNA重组技术和重叠引物介导的DNA重组技术,将长度为1 653 bp的luc报告基因分别敲入到E.coli W3110染色体lacZ,lacY和lacA基因的位置,建立了一系列具有新遗传表型的菌株:CWL2、CWL4和CWL6.荧光素酶分析表明,外源报告基因luc能在这3个结构基因处有效的组成型表达.为了进一步确定外源基因的表达情况,用霍乱毒素B亚单位基因ctxb替换了lacZ基因,构建了新菌株CWD1.证明了以单拷贝形式存在在大肠杆菌染色体CWD1上的ctxb基因能有效的表达CTB蛋白并能将其分泌至细胞外培养液中.结果初步确定了大肠杆菌染色体上的lac操纵子结构基因位点适合外源基因的敲入和表达.

作者陈伟 ^[1] 李山虎 ^[2] 于梅 ^[2] 王鸣刚 ^[3] 周建光 ^[2] 学术成果认领

作者单位军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850;厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室,厦门,361005;广东药学院生命科学与生物制药学院,广州,510240 ^[1] 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850 ^[2] 厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室,厦门,361005 ^[3]

关键词 pBR322-Red 重组工程基因敲入霍乱毒素B亚单位

主题词基因(Genes)染色体(Chromosomes)工程(Engineering)霍乱毒素(Cholera Toxin)研究(Research)

分类号 Q87

栏目名称

研究报告

DOI 10.3321/j.issn:0253-9772.2006.01.014

发布时间 2006-03-23

基金项目

军队科研项目（01MA089）