换一批内切葡聚糖酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达及其酶学性质研究
Expression of endoglucanase gene in Bacillus Megaterium and characterization of recombinant enzyme
摘要通过PCR方法将已克隆的内切葡聚糖酶基因(GenBank No.DQ782954)信号肽编码序列去除,然后与表达载体pHIS1525连接后转化大肠杆菌DH5α,筛选出阳性转化子DH5 α-pHIS1525-G7并提取质粒进一步转化巨大芽孢杆菌WH320原生质体,获得基因工程菌WH320-pHIS1525-G7.刚果红染色和SDS-PAGE分析表明该基因在巨大芽孢杆菌中得到了有效表达.基因工程菌经优化培养后,胞外上清液中的酶活力可达889 U,是出发菌株(即枯草芽孢杆菌C-36)的11.22倍.酶学性质研究表明:该酶的最适反应温度与pH值分别为65℃与pH6.0,在pH 4.5～10.0范围内50℃保温30min可保持在最高酶活的80%以上.
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