换一批ErbB3和ErbB4特异性配体筛选系统的建立及neuregulin-1突变体的筛选
Establishment of an ErbB3- and ErbB4-specific ligand screening system,and a screen of neuregulin-1 mutants
摘要Neuregulin-1(NRG1, 纽兰格林)通过活化ErbB2/ErbB4二聚体具有治疗心衰的作用, 目前已完成临床二期.为避免作为心衰治疗药物时同时激活ErbB3并产生副作用, 因此用NRG1变异体的方法寻找能对ErbB4专一性激活的配体.文章构建了带有不同筛选标记的ErbB2、ErbB3、ErbB4细胞表达质粒, 将ErbB2/ErbB3、ErbB2/ErbB4质粒共转染至CHO细胞, 建立了ErbB2/ErbB3特异性表达和ErbB2/ErbB4特异性表达的细胞株.通过与新生大鼠原代心肌细胞比较, 证明ErbB2/ErbB4细胞株信号传导功能与心肌细胞相似, NRG1可以激活下游的AKT信号途径、PI3K信号途径, 并表现出良好的剂量效应.因此可以通过检测与心肌功能密切相关的下游信号AKT磷酸化水平快速筛选抗心衰药物, 并通过与ErbB2/ErbB3信号激活水平比较鉴定其对心肌细胞的特异性.文章还构建了31个不同的NRG1突变体并在大肠杆菌中成功的表达和纯化.将这些突变体用于刺激两个细胞株, 通过检测AKT磷酸化水平, 发现这些突变体对ErbB2/ErbB3与ErbB2/ErbB4受体的激活能力不同.进一步检测其中5个ErbB2/ErbB4激活特异性发生改变的突变体与两对受体的亲和力, 发现这些突变体和ErbB2/ErbB4与ErbB2/ErbB3受体亲和力的变化有一致性.最终筛选到了4个可以更特异性激活ErbB2/ErbB4受体的突变体作为更有效治疗心衰的候选药物.
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