凡纳滨对虾TCP-1-eta基因的克隆及与耐寒性状的相关性

Molecular cloning of Litopenaeus vannamei TCP-1-eta gene and analysis on its relationship with cold tolerance

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摘要为研究凡纳滨对虾耐寒性状的分子机理,文章克隆了凡纳滨对虾的耐寒相关基因TCP-1-eta并对其与耐寒性状的关系进行了研究.首先,根据电子克隆所得序列设计引物,采用RT-PCR方法克隆得到长1 705bp的TCP-1-eta基因序列,其中包括1 629 bp的完整开放阅读框,编码542个氨基酸残基.然后,运用荧光定量PCR对TCP-1-eta墓因进行时空表达谱的分析:(1)组织表达分析结果显示,该基因在凡纳滨对虾肌肉组织中表达量最高;(2)不同低温处理下的表达结果显示,该基因在15℃开始呈上调表达,13℃时表达量最高;(3)13℃低温处理的表达结果显示,该基因在36 h内呈小幅上调表达,但 36 h后表达量显著升高,48 h表达量达到0h的150倍.进一步采用PCR-RFLP方法对216只凡纳滨对虾TCP-1-eta基因进行了SNP多态性检测,并将其与耐寒性状进行了关联分析.在该基因编码区第731碱墓上发现C/T突变,方差分析结果表明该位点的不同基因型与耐寒力指标CDH (Cooling-degree hours)值相关(P < 0.05),其中CC基因型的耐寒能力比TT基因型强.