裂殖酵母SAGA复合物亚基Spt20参与钙调蛋白磷酸酶调节的Cl-胞内平衡

SAGA complex subunit Spt20 involves in the calcineurin-mediated Cl-homeostasis in Schizosaccharomyces pombe

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摘要SAGA(Spt-Ada-Gcn5 acetyltransferase)复合物是真核生物中高度保守的蛋白复合体,参与转录激活、mRNA转运等诸多生物学过程.为了探究SAGA复合物亚基的潜在生物学功能,文章以裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)SAGA复合物核心结构亚基Spt20为诱饵蛋白进行酵母双杂交筛选,获得了Ppb1蛋白.Ppb1 是真核生物重要信号分子-钙调蛋白磷酸酶的催化亚基.酵母双杂交验证及免疫共沉淀实验均表明Spt20与Ppb1 可以在体内发生蛋白相互作用.裂殖酵母ppb1+缺失突变体对高浓度Cl-敏感,而spt20+缺失突变体则能抵抗高浓度的外源Cl-,维持细胞的正常生长.荧光共定位分析表明,当外源Cl-浓度升高时,Ppb1蛋白能够从细胞质迁移入核,与Spt20蛋白在细胞核内发生共定位.遗传分析显示,spt20+缺失可以抑制ppb1+缺失突变体对Cl-高度敏感的表型,spt20+与ppb1+处于Cl-平衡调节的同一通路,且spt20+位于ppb1+的下游.上述结果表明,spt20+ 缺失突变体耐受外源高浓度Cl-,Spt20参与了钙调蛋白磷酸酶调节的Cl-胞内平衡.在高等生物中胞内Cl-浓度异常升高与心肌缺血/再灌注损伤等疾病的发生密切相关.鉴于Spt20在真核生物中高度保守,Spt20可能成为潜在的药物靶点应用于Cl-失衡相关疾病的防治中.