换一批猪免疫抑制因子MNSFβ的克隆、表达与组织分布
Cloning, eukaryotic expression and spatial expression patterns of porcine MNSFβ
摘要MNSFβ (Monoclonal nonspecific suppressor factor β)是一种天然免疫抑制因子,参与机体免疫反应、应激反应、细胞分裂、细胞凋亡和核转运等生物过程,但其功能在猪中鲜有报道.文章通过电子克隆得到猪MNSFβ的全长序列,利用RT-PCR首次从猪脾脏中克隆了包含完整开放阅读框的MNSFβ cDNA(GenBank登录号:KF77642500)片段,测序正确后分析猪MNSFβ的核酸序列和蛋白质序列.将猪MNSFβ基因编码区序列插入表达载体pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-MNSFβ;用脂质体将重组质粒转染到猪脐静脉内皮细胞(SUVEC)中,利用荧光检测、Western blot和激光共聚焦分析SUVEC中猪MNSFβ的表达;并用实时荧光定量PCR对猪MNSFβ在不同组织的表达丰度进行分析.结果表明:猪MNSFβ基因全长402 bp,编码133个氨基酸,含一个外显子.生物信息学分析表明,猪MNSFβ为无信号肽的稳定蛋白,由泛素样结构域与核糖体蛋白S30组成.对猪MNSFβ与已发现的18个物种的MNSFβ氨基酸序列进行相似性分析和进化树分析,显示其蛋白相似度均在91％以上,且进化距离都小于0.05,说明MNSFβ在各物种间高度保守.荧光检测和Western blot结果显示,猪MNSFβ在SUVEC中成功表达,激光共聚焦显示其在细胞质与细胞核内均有分布.组织表达谱分析表明,猪MNSFβ在各免疫相关组织广泛表达,但在肺脏中未检测到表达,说明其在机体免疫反应中发挥重要作用.
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关键词
猪MNSFβ真核表达组织分布porcinemonoclonal nonspecific suppressor factor β (MNSFβ)eukaryotic expressionspatial expression patterns
医学主题词
猪(Swine)组织分布(Tissue Distribution)抑制因子, 免疫(Suppressor Factors, Immunologic)蛋白(Egg White)免疫(Immunity)
栏目名称
DOI
10.3724/SP.J.1005.2013.01377
发布时间
2014-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31072115）
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