siRNA 干扰绵羊胚胎成纤维细胞 Lig4基因增加同源重组载体重连修复效率

Increasing the efficiency of homologous recombination vec-tor-mediated end joining repair by inhibition of Lig4 gene using siRNA in sheep embryo fibroblasts

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摘要在动物细胞中，抑制非同源末端连接(Non-homologous end joining, NHEJ)修复途径，可以提高同源重组(Homologous recombination, HR)修复基因组双链断裂(Double-strand brakes, DSBs)的发生概率。为了提高绵羊胚胎成纤维细胞的 HR 效率，针对 NHEJ 修复途径中的关键因子 Lig4(DNA ligase 4)基因，本文设计合成4个具有靶向性的 siRNA(Small interfering RNA)。绵羊胚胎成纤维细胞经电转染导入 siRNA，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和 Western blotting 检测，筛选出有效抑制 Lig4基因表达的2个 siRNA。应用质粒重连法检测HR 修复效率，将 I-SceⅠ酶线性化的 HR 质粒和 siRNA 共转染绵羊胚胎成纤维细胞，经72 h 培养及流式细胞仪检测，与对照组细胞比较，结果表明 HR 质粒重连效率提高了3~4倍。瞬间干扰 Lig4基因的表达可提高 HR质粒重连效率，为改善绵羊胚胎成纤维细胞基因打靶效率提供理论基础。

作者王伟 ^[1] 王玉霜 ^[2] 黄兰兰 ^[3] 简子健 ^[4] 王新华 ^[3] 刘守仁 ^[3] 皮文辉 ^[3] 学术成果认领

作者单位新疆农垦科学院，绵羊遗传改良与健康兺殖国家重点实验室，石河子 832000; 新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐 830052 ^[1] 中国农业大学动物科技学院,北京,100193 ^[2] 新疆农垦科学院，绵羊遗传改良与健康兺殖国家重点实验室，石河子 832000 ^[3] 新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐,830052 ^[4]

关键词 siRNA Lig4 基因同源重组绵羊胚胎成纤维细胞 small interfering RNA DNA ligase 4 gene homologous recombination sheep embryo fibroblasts

主题词绵羊(Sheep)胚胎结构(Embryonic Structures)成纤维细胞(Fibroblasts)基因(Genes)同源重组(Homologous Recombination)

栏目名称 研究报告

DOI 10.16288/j.yczz.16-074

发布时间 2016-09-28

基金项目

国家自然科学基釐项目 兵团国际合作项目(编号2013BC004)资助[Supported by the National Natural Science Foundation of China International Cooperation Program in Xinjiang Production and Construction Corps (No.2013BC004)]