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siRNA 干扰绵羊胚胎成纤维细胞 Lig4基因增加同源重组载体重连修复效率

Increasing the efficiency of homologous recombination vec-tor-mediated end joining repair by inhibition of Lig4 gene using siRNA in sheep embryo fibroblasts

摘要在动物细胞中,抑制非同源末端连接(Non-homologous end joining, NHEJ)修复途径,可以提高同源重组(Homologous recombination, HR)修复基因组双链断裂(Double-strand brakes, DSBs)的发生概率。为了提高绵羊胚胎成纤维细胞的 HR 效率,针对 NHEJ 修复途径中的关键因子 Lig4(DNA ligase 4)基因,本文设计合成4个具有靶向性的 siRNA(Small interfering RNA)。绵羊胚胎成纤维细胞经电转染导入 siRNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和 Western blotting 检测,筛选出有效抑制 Lig4基因表达的2个 siRNA。应用质粒重连法检测HR 修复效率,将 I-SceⅠ酶线性化的 HR 质粒和 siRNA 共转染绵羊胚胎成纤维细胞,经72 h 培养及流式细胞仪检测,与对照组细胞比较,结果表明 HR 质粒重连效率提高了3~4倍。瞬间干扰 Lig4基因的表达可提高 HR质粒重连效率,为改善绵羊胚胎成纤维细胞基因打靶效率提供理论基础。

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遗传

遗传

2016年38卷9期

831-840页

MEDLINEISTICPKUCSCDCABP

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