不同电转仪的电转参数、质粒用量和拓扑结构对猪胎儿成纤维细胞转染效率的影响

Effects of parameters, plasmid dosages and topological structures on transfection efficiency of porcine fetal fibroblasts using different electroporators

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摘要为获得猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)最佳的电转染效率,本研究利用荧光激活细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)辅助优化NEPA 21和NucleofectorTM 2b两种电转仪电转染PFFs细胞的参数,比较不同质粒用量和拓扑结构在ECM(R) 830、NEPA 21和NucleofectorTM 2b中的转染效率.结果显示:NEPA 21电转PFFs的最佳穿孔参数为脉冲电压200 V,脉冲长度3 ms,脉冲间隔50 ms,脉冲次数3次,脉冲电压衰减幅度10％;NucleofectorTM 2b在U-023的转染参数下达到最高转染效率.ECM(R) 830和NucleofectorTM 2b的最适质粒用量都为10 μg,而NEPA 21为8μg;超螺旋质粒比线性化质粒的转染效率更高,且3种仪器中NucleofectorTM 2b转染效果最佳.本研究综合考虑电转仪、电转参数、质粒用量和拓扑结构的影响因素以优化PFFs的电转条件,为高效制备转基因猪及基因编辑猪的研究奠定基础.

作者钟翠丽 ^[1] 李国玲 ^[1] 莫健新 ^[1] 全绒 ^[1] 王豪强 ^[1] 李紫聪 ^[1] 吴珍芳 ^[2] 张献伟 ^[2] 学术成果认领

作者单位华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心,广州,510642 ^[1] 华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心,广州510642;广东温氏食品集团股份有限公司,新兴527400 ^[2]

关键词电转染猪胎儿成纤维细胞 ECM(R) 830 NEPA 21 NucleofectorTM 2b electroporation porcine fetal fibroblasts(PFFs)ECM(R) 830 NEPA 21 NucleofectorTM 2b

主题词转染(Transfection)猪(Swine)成纤维细胞(Fibroblasts)胎儿(Fetus)质粒(Plasmids)

栏目名称 技术与方法

DOI 10.16288/j.yczz.17-080

发布时间 2017-12-14

基金项目

国家转基因重大专项(编号:2016ZX08006002)课题,广东省科技厅平台条件建设项目 粤西“扬帆计划”博士后人才扶持基金资助项目(2016)资助[Supported by the National Transgenic Major Project Department of Science and Technology of Guangdong Province Yuexi "Flying Sail Program" Postdoctoral Foundation(2016)]