换一批基于重组酶聚合酶扩增的转基因玉米和大豆现场快速检测方法
Onsite rapid detection method for genetically modified maize and soybean based on recombinase polymerase amplification
摘要随着我国转基因玉米和转基因大豆的商业化种植,为了保证我国生物育种产业的健康发展,迫切需要开发转基因玉米和大豆的现场快速检测技术.本研究针对转基因玉米和大豆现场快速检测技术的不足,提出了一种基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)的快速检测方法.选择具有代表性的转基因玉米(双抗12-5、DBN9936、MON810)和大豆(DBN9004、GTS40-3-2、SHZD32-1)为检测对象,根据其侧翼序列,筛选特异性引物和探针,建立了高特异性、灵敏度达20拷贝的RPA扩增体系.为了快速获取DNA,种子样品利用核酸释放剂获得可用于RPA扩增的模板,为了消除叶片中叶绿素并快速获取DNA,叶片样品利用本实验室研发的核酸快速一体化提取装置快速获取DNA,以消除叶绿素干扰.结合便携式金属浴启动RPA扩增,蓝光切胶仪用于可视化检测,构建了转基因玉米和大豆的现场快速检测方法.该方法检测时间约为20 min,与常规PCR检测结果一致,适用于现场快速检测,无需大型设备,具备较强的实用性和适应性.该方法为转基因作物现场检测提供了技术支持,并为其他核酸快速检测技术的应用提供参考.
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关键词
转基因作物RPA反应荧光可视化现场检测快速提取genetically modified cropsRPA reactionfluorescence visualizationfield detectionrapid extraction
栏目名称
DOI
10.16288/j.yczz.24-322
发布时间
2025-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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