换一批摘要KyoT为LIM结构域蛋白,可与转录因子RBP-Jk相互作用.为了研究其功能,用酵母双杂交法筛选了与KyoT相互作用的蛋白.以KyoT2为诱饵筛选人淋巴结cDNA文库,从5×106个克隆中共获得42个阳性克隆.提取质粒进行酶切鉴定,获得22个非重复克隆.对此22个克隆进行序列分析,共获得13种基因,其中包括已知的KyoT相互作用蛋白RBP-Jk和两个未知基因.另一种被筛选到的已知基因是激活状态的信号转导物和转录因子1活化物的抑制蛋白(protein inhibitor of activated signal transducer and activator of transcription 1,PIAS1).由于KyoT在小鼠睾丸中表达较高,因此进一步探讨了KyoT2与PIAS1的相互作用.并首先在酵母中证实KyoT2与PIAS1的相互作用并得到阳性结果.进而在大肠杆菌中表达纯化了KyoT2蛋白,并以此为抗原制备了抗KyoT2多克隆抗体,再用GST-pull down实验验证了KyoT2和PIAS1在体外的相互作用.成功筛选了KyoT相互作用蛋白,发现并验证了KyoT与PIAS1的相互作用,对探讨KyoT的功能具有重要意义.
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发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（39970376）
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