一种构建改形单域抗体的方法

A Method for Constructing Reshaping Single-Domain Antibody

二维码有效期 120s

摘要为验证一种构建改形单域抗体的实用新方法,与以往方法不同的是,该方法不需要对抗体进行空间结构模拟,以确定人源抗体的FRs接受序列及在人源FRs接受序列中哪些氨基酸残基需要突变,并且该方法将抗体的改形与亲和力成熟于同一过程完成.利用该方法构建了改形抗CD28重链单域抗体.根据一种鼠源抗CD28重链单域抗体的氨基酸序列,于GenBank中查得两条与之最同源的人源抗体序列,利用其中一条的FRs作为改形抗体的主框架进行改形构建.将鼠源抗体的CDR区插入到人源FR区后,对人源FR区的一些氨基酸残基进行替换突变,替换的氨基酸残基数及替换原则主要是根据对查到的人源抗体序列、鼠源抗体序列,以及这些序列与Kabat分类中的种属序列进行的比较.为了增加改形抗体基因的多样性,对要被替换的氨基酸残基在基因合成中采用简并的方式,使要被替换的氨基酸残基和替换的氨基酸残基都有机会出现,二者出现的几率各为50%.同时,在将大小不同的合成核苷酸片段采用重叠PCR扩增以获得完整改形抗体基因时,采用高Mg2+浓度下和使用Taq DNA聚合酶,以进一步随机引入突变.利用重叠PCR产物构建了一个噬菌体抗体库,经过3轮淘选后,获得了几个具有较高免疫学活性的改形抗体.对其中的两个抗体进行了进一步研究,将两个抗体的基因在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,复性后的表达蛋白仍具有较高的免疫学活性.结果表明该方法是有效可行的.