换一批
换一批神经生长抑制因子相互作用蛋白的分子克隆、鉴定及其生物学特性
Molecular Cloning and Identification and Biological Activity of GIF-interacting Protein(s)
摘要为了探讨神经生长抑制因子(Neuronal growth inhibitory factor,GIF)与Alzheimer's病(Alzheimer's disease,AD)的关系,将GIF的cDNA全基因克隆到载体pHyblex中,运用酵母双杂交系统从Alzheimer's病人脑cDNA文库中筛选出与GIF相互作用蛋白的cDNA克隆.免疫共沉淀和蛋白质印迹实验进一步验证了该蛋白在体内与GIF相互作用的特异性.克隆并鉴定了其中1个与GIF特异性结合的蛋白,与人细胞核dUTP焦磷酸酶(DUT)同源.进一步构建了重组表达质粒pGEX-4T-1/DUT,转化大肠杆菌BL21,经谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析、凝血酶酶切和Sephacryl S100纯化,得到纯度95%以上的dUTPase蛋白.体外生物学活性检测表明,表达的dUTPase蛋白可以与GIF共同作用嗜铬细胞瘤株(pheochromocytoma)PC12,对细胞的生长产生抑制作用.
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