换一批
换一批摘要以临床分离的一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PA68作受体菌,将具有卡那霉素抗性标记的质粒pSMC28通过电转化导入到受体菌中,研究细胞生长状态、电击电压、细胞浓度、感受态细胞的贮备方式对转化效率的影响.结果表明,在细胞生长至OD540=0.7～0.8时收集菌体,在低温(2℃)条件下,制备浓度为1011个细胞/mL的感受态细胞,在较高的电压(2.6 kV)电击下,能获得较高的转化效率.最高可达1.68×108个转化子/μg DNA(CFU/μg DNA).用此优化的转化条件,在国际上首次成功地将Mu转座复合物导入到P.aeruginosa中,并获得2.4×104 CFU/μg DNA的高转化效率.由于Mu转座重组技术具有随机单点插入的优点,克服了传统转座子能在染色体上迁移的缺点,保证了表型的改变与转座子插入位点所在的基因突变的一一对应关系,为进一步研究P.aeruginosa的基因组功能奠定基础.
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