换一批
换一批日本扁柏核基因组微卫星的分离与鉴定
Isolation and Characterization of Nuclear Microsatellites from Chamaecypress obtusa Endl.
摘要以日本扁柏4个种源的DNA样品为材料,经NdeⅡ酶切并电泳后回收300～1000 bp DNA片段,与含有生物素标记的(CT)15探针杂交,再用磁珠(DynabeadsR M280 streptavitin beads)固定杂交产物,成功地实现了日本扁柏核基因组微卫星的高效分离.以pUC118 BamH I/BAP为载体,E.coli为寄主,构建了日本扁柏2个富含微卫星的基因组文库,共获得2200多个阳性克隆.从构建的基因组文库中,随机挑选480个阳性克隆进行测序,发现含有微卫星的克隆比例高达65.6%,其中215个非同源性克隆共含有380个微卫星位点,平均每个克隆含1.7个.微卫星种类以与探针(CT)15互补的(GA/CT)n为主,占86.1%,同时还存在(TG/AC)n和3～4个碱基为单元构成的微卫星,如(ATAG)n、(CAGA)n、(TGA)n、(ACG)n、(TCA)n、(TCT)n等.利用Oligo 5.1软件为114个含有微卫星的克隆共128个微卫星位点设计出了PCB扩增引物.
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