换一批一个新的人类睾丸特异基因的cDNA克隆和表达分析
Molecular Cloning and Expression Analysis of a Novel Human Testis-specific Gene
摘要运用"数据库消减杂交"(Digital Differential Display)方法筛选人类睾丸特异表达新基因,获得了有差异显示的代表新基因的克隆重叠群,挑选其中一个克隆重叠群HS.129794进行多组织RT-PCR,初步证实该重叠群在人睾丸中有高表达.然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发,采用生物信息学的方法快速克隆了一个人类新基因的全长cDNA序列,其全长2 430 bp,开放阅读框为676～1 248 bp,定位于3p21.1,编码由190个氨基酸组成,分子量为20 417.8 Da,等电点为5.23的一个偏酸性蛋白质,该蛋白与已知蛋白质无明显同源性.克隆实验验证该基因阅读框完全正确,半定量RT-PCR进一步显示该基因在人不同发育时期的睾丸及精子细胞中有表达,推测其可能与精子生成相关,暂命名为SRG5(Testis Spermatogenesis Related Gene 5,SRG5)(GenBank登录号:AY221117).SRG5基因的成功克隆表明,"数据库消减杂交"与实验验证相结合的技术路线是一种快捷高效的发现更多人类功能新基因的新策略.
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