换一批
换一批一个新的睾丸特异表达基因的克隆及功能的初步分析
Molecular Cloning and Primary Functional Analysis of a Novel Human Testis-specific Gene
摘要运用"数据库消减杂交"(digital differential display )方法来筛选人类睾丸特异表达新基因,获得了有差异显示的代表新基因的克隆重叠群.挑选其中一个克隆重叠群HS.326528进行多组织RT-PCR,初步获得该重叠群在人睾丸中有高表达.从该重叠群的IMAGE出发,采用生物信息学的方法快速克隆了一个人类新基因的全长cDNA序列,其全长1 044 bp,开放阅读框为214～529 bp,定位于15q26.2,编码由105个氨基酸组成、分子量为11.7 kD、等电点为10.09的一个碱性蛋白,该蛋白与已知蛋白无明显的同源性,克隆实验证明该基因的阅读框完全正确,RT-PCR和Northern blot显示该基因在人类睾丸中特异表达,实时PCR结果表明:该基因在成人睾丸中高表达,在精子中有中度表达,在胚胎睾丸中低表达,推测该基因与精子的生成有关,命名为SRG8(homo sapiens spermatogenesis -related gene 8)(GenBank登录号:AY489187),该基因编码的蛋白定位于细胞核.流式结果分析表明,SRG8基因能够促使HeLa细胞由S期向G2期的转变,从而加速细胞的分裂.这些结果表明SRG8基因可能在睾丸的发育及精子的形成过程中起重要的作用.
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