miR-9-5p通过SIRT1/NF-κB通路促进胰腺癌细胞凋亡的实验研究
Experimental study on miR-9-5 p role in promoting apoptosis of pancreatic cancer cells through SIRT1/NF-κB pathway
摘要目的 探讨miR-9-5p通过调控SIRT1及NF-κB表达对胰腺癌细胞(PANC-1)凋亡相关基因Caspase-3表达的影响.方法 使用miR-9-5p mimic慢病毒转染人胰腺癌PANC-1细胞建立稳转株(mimic组),空载体转染作为阴性对照组(NC组),以未处理的PANC-1细胞作为空白对照组(空白组).采用qRT-PCR检测PANC-1细胞中miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA的表达水平;Western Blot检测SIRT1、NF-κB通路相关蛋白及Caspase-3蛋白表达量;ELISA检测细胞裂解液中SIRT1及Caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验明确miR-9-5p和SIRT1的靶向关系;Pearson相关分析确定miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA表达的相互关系.结果 mimic组miR-9-5p mRNA表达较对照组明显升高,结果有统计学意义,提示转染成功.与空白组及NC组相比,mimic组SIRT1 mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65上调(P<0.01),Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.01).双荧光素酶报告基因显示miR-9-5 p可抑制野生型SIRT1细胞的荧光活性,miR-9-5 p可靶向调控SIRT1的表达;Pear-son相关分析发现miR-9-5p和SIRT1的表达水平呈负相关(r=-0.849,P<0.05);miR-9-5p和Caspase-3的表达水平呈正相关(r=0.796,P<0.05).结论 过表达miR-9-5p可促进PANC-1细胞凋亡相关基因Caspase-3的表达,其机制可能与靶向调控SIRT1继而调节NF-κB通路有关,这将为胰腺癌的诊断及治疗提供新的思路.
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