换一批细菌内同源重组法构建LEDGFp52基因腺病毒载体及其体外表达
Construction of recombinant adenoviral vector carrying LEDGFp52 gene by homologous recombination in bacteria and its expression in vitro
摘要目的 构建表达人类晶状体来源的上皮生长因子p52(lens epithelium derived growth factor p52,LEDGFp52)重组腺病毒载体,检测LEDGFp52重组腺病毒能否在真核细胞中有效表达目的基因.方法 将LEDGFp52基因片段亚克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-LEDGFp52,将腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-LEDGFp52与5型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183细菌,经细菌内同源重组产生携带LEDGFp52基因的重组腺病毒载体pAd-LEDGFp52,将pAd-LEDGFp52经脂质体法转化293细胞包装产生重组腺病毒Ad-LEDGFp52,将Ad-LEDGFp52体外转染293细胞,CPE法及Westernblot观察目的基因的表达.结果 构建了表达LEDGFp52基因的重组腺病毒质粒,E.coli内成功同源重组腺病毒,在293细胞内包装产生重组腺病毒Ad-LEDGFp52,滴度可达5×1012 PFU
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DOI
10.3969/j.issn.1003-5141.2006.12.006
发布时间
2006-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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