真核基因重组Sox2及其在小鼠角膜基质细胞中的表达

Eukaryotic recombinant Sox2 and its expression in keratocytes

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摘要目的基因重组构建具有穿膜活性的核转录因子Sox2真核表达系统,将其转染至小鼠角膜基质细胞,检测其在小鼠角膜基质细胞中的表达.方法利用重叠延伸PCR法重组目的基因Sox2-PTD构建质粒,测序检测重组DNA序列是否克隆正确.确定正确序列后将其转染至小鼠角膜基质细胞.倒置显微镜下观察细胞生长情况,转染后约10 d免疫荧光化学鉴定其表达.结果成功构建质粒PCDNA3.1-Sox2-PTD；4个转录因子测序结果显示:Sox2基因测序结果与基因模板序列100％一致；成功转染至小鼠角膜基质细胞中；荧光显微镜下观察可见,Sox2-PTD在细胞浆和细胞核内均有表达,主要分布在细胞核内.结论成功构建核转录因子的真核表达系统,可转染至小鼠角膜基质细胞并引起细胞形态和表型的变化,为真核重组外源蛋白诱导角膜基质细胞转化为多能干细胞奠定基础.

作者李晓霞 ^[1] 袁军 ^[1] 陈建苏 ^[2] 学术成果认领

作者单位郑州市第二人民医院眼科, 河南省郑州市,450003 ^[1] 510632 广东省广州市,暨南大学再生医学教育部重点实验室,暨南大学医学院眼科研究所 ^[2]

关键词 Sox2 角膜基质细胞诱导全能干细胞 Sox2 keratocytes induced pluripotent cells

主题词角膜基质细胞(Corneal Keratocytes)小鼠(Mice)基因(Genes)转染(Transfection)全能干细胞(Totipotent Stem Cells)

栏目名称 实验研究

发布时间 2016-12-29

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