人原代晶状体上皮细胞中PEDF基因下调引起波形蛋白和αB-晶状体蛋白含量的变化

Reduction of PEDF regulating expression of vimentin and αB-crystallin in human lens epithelial cells

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摘要目的研究人原代晶状体上皮细胞中,下调色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)的表达对波形蛋白和αB-晶状体蛋白表达的影响.方法取20～ 35岁青年人晶状体上皮细胞进行原代培养.构建三种短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)以特异性下调原代人晶状体上皮细胞中的PEDF基因RNA表达水平.感染细胞后,用Real-time PCR检测PEDF基因mRNA的表达水平,确定RNA干扰效率.人原代晶状体上皮细胞PEDF基因RNA干扰48 h后,用Western Blot检测其中波形蛋白以及αB-晶状体蛋白表达水平的变化,以shRNA-scramble组为阴性对照组.结果人原代晶状体上皮细胞被成功分离培养,带有绿色荧光蛋白的表达PEDF shRNA的病毒载体对人原代晶状体上皮细胞的感染效率都在80％左右.Realtime PCR结果显示PEDF基因mRNA的表达明显被三种shRNA下调.Western Blot结果显示PEDF基因的表达下调引起了波形蛋白的表达下降(在三个实验组中分别下降了72％、79％和93％)以及αB-晶状体蛋白的表达增加(在三个实验组中分别增加了219％、204％、93％).结论人原代晶状体上皮细胞中PEDF基因下调可引起维持晶状体透明性的两种重要蛋白的改变,提示PEDF与白内障形成有一定的联系.