换一批miR-17-5p对小梁网细胞外基质蛋白表达的调控作用及其机制
miR-17-5p targets Smad3 to regulate extracellular matrix protein expression in trabecular meshwork cells
摘要目的 探讨miR-17-5p对小梁网细胞外基质(ECM)蛋白表达的调控作用及其机制.方法 收集原发性开角型青光眼(POAG)患者和正常小梁网组织,利用RT-PCR和Western blot分别检测miR-17-5p和Smad3表达;将人小梁网细胞(HTMCs)分为miR-17-5p mimics和miR-17-5p NC组,分别转染载有miR-17-5p mimics组和miR-17-5p NC的载体,Western blot检测HTMCs中ECM蛋白纤连蛋白(FN)、胶原蛋白I(CoL-I)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;靶基因预测库预测miR-17-5p靶基因,荧光素酶报告载体联合Western blot鉴定靶基因.HTMCs中共转染miR-17-5p mimics和Smad3过表达载体,Western blot检测各转染组细胞中Smad3、FN、CoL-I、α-SMA的蛋白表达.结果 正常小梁网组织中miR-17-5p表达量为1.16±0.11,高于POAG小梁网组织的0.19±0.04,差异有统计学意义(t=10.641,P<0.001);正常小梁网组织中Smad3蛋白表达量为0.31±0.06,低于POAG小梁网组织的0.86±0.07,差异有统计学意义(t=8.105,P<0.001).miR-17-5p mimics组HT-MCs中FN、CoL-I和α-SMA蛋白表达均低于miR-17-5p NC组,差异均有统计学意义(均为P<0.001);靶基因预测库预测及荧光素酶报告载体联合Western blot鉴定证实Smad3为miR-17-5p下游靶基因;miR-17-5p+Smad3转染组HTMCs中Smad3、FN、CoL-I和α-SMA蛋白表达均高于miR-17-5p+vector转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.001).结论 miR-17-5p能抑制HTMCs的ECM蛋白表达,这一过程可能是通过靶向抑制Smad3表达而实现的.
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