补阳还五汤对高糖环境下miR-21介导的人视网膜微血管内皮细胞自噬的影响
Effect of Buyang Huanwu decoction on miR-21-mediated autophagy in human retinal capillary endothelial cells under high glucose
摘要目的 观察补阳还五汤对高糖环境下miR-21介导的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)自噬的影响,以期为DR自噬调控机制及药物治疗提供依据.方法 HRCECs随机分5组,即正常对照组、高糖组、补阳还五汤组、miR-21 mimic组、miR-21 mimic+补阳还五汤组.除正常对照组外,其余各组细胞于25.0 g·L-1葡萄糖环境中培养,建立高糖损伤模型,补阳还五汤组加用5 g·L-1补阳还五汤水提液干预;miR-21 mimic组孵育转染miR-21 mimic的HRCECs;miR-21 mimic+补阳还五汤组用5 g·L-1补阳还五汤水提液干预转染miR-21 mimic的HRCECs.荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-21的表达,Western blot检测各组细胞中LC3蛋白表达.结果 经转染miR-21 mimic后,大部分HRCECs呈绿色荧光,荧光强度为32.708±1.001.实时荧光定量PCR检测结果显示,miR-21 mimic组HRCECs的miR-21相对表达量为106.677±5.787,明显高于高糖组(5.892±0.341)和正常对照组(0.993±0.015),差异均有统计学意义(均为P<0.05).高糖组和miR-21 mimic组HRCECs中LC3蛋白相对表达量均较正常对照组升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05),且miR-21 mimic组HRCECs中LC3蛋白相对表达量高于高糖组(P=0.001).补阳还五汤组HRCECs中LC3蛋白相对表达量低于高糖组和miR-21 mimic组(均为P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义(P=0.197).miR-21 mimic+补阳还五汤组HRCECs中LC3蛋白相对表达量低于miR-21 mimic组,但高于补阳还五汤组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),与高糖组比较差异无统计学意义(P=0.930).结论 高糖环境下,miR-21介导HRCECs的自噬,补阳还五汤可以下调HRCECs的miR-21表达,进而减少细胞自噬.
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