榅桲总黄酮对高糖诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响及作用机制
Effects of total flavone of Cydonia oblonga on high glucose-induced oxidative damage in human lens epithelial cells and its mechanism
摘要目的 探讨榅桲总黄酮对高糖诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响及作用机制.方法 用高糖诱导人晶状体上皮细胞建立细胞损伤模型.取人晶状体上皮细胞加入含有30 mmol·L-1葡萄糖的培养基处理24 h,记为高糖组.用含有5.5 mmol·L-1葡萄糖的培养基处理24 h记为对照组.取人晶状体上皮细胞按照每孔5 ×103个接种于96孔板,分别加入含有 10 mmol·L-1、20 mmol·L-1、40 mmol·L-1 榅桲总黄酮与 30 mmol·L-1葡萄糖的培养基处理24 h,记为高糖+低楹桲总黄酮组、高糖+中榅桲总黄酮组、高糖+高榅桲总黄酮组.用Lipofectamine2000转染试剂向人晶状体上皮细胞分别转染anti-miR-NC、anti-miR-370,随后加 30 mmol·L-1 葡萄糖处理 24 h,命名为高糖+anti-miR-NC组、高糖+anti-miR-370组.分别向人晶状体上皮细胞转染miR-NC、miR-370 mimics,加30 mmol·L-1葡萄糖的培养基及40 mmol·L-1榅桲总黄酮处理24 h,记为高糖+榅桲总黄酮+miR-NC组、高糖+榅桲总黄酮+miR-370组.采用ELISA法监测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR检测miR-370表达量,Western blot检测凋亡蛋白表达情况.结果 与对照组相比,高糖组人晶状体上皮细胞SOD和CAT活性降低,MDA含量升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与高糖组相比,高糖+低、中、高榅桲总黄酮组人晶状体上皮细胞SOD和CAT的活性升高,MDA含量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05).与对照组相比,高糖组人晶状体上皮细胞凋亡率,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与高糖组相比,高糖+低、中、高楹桲总黄酮组人晶状体上皮细胞凋亡率,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05).对照组、高糖组、高糖+低榅桲总黄酮组、高糖+中榅桲总黄酮组、高糖+高榅桲总黄酮组人晶状体上皮细胞miR-370表达量分别为1.00±0.00、4.04±0.36、3.22±0.24、2.42±0.23 和 1.62±0.14,5 组比较差异有统计学意义(F=256.138,P<0.05).与高糖+anti-miR-NC组相比,高糖+anti-miR-370组人晶状体上皮细胞miR-370表达量降低,SOD和CAT活性升高,MDA含量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001).与高糖+anti-miR-NC组相比,高糖+anti-miR-370组人晶状体上皮细胞凋亡率,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001).与高糖+榅桲总黄酮+miR-NC组相比,高糖+榅桲总黄酮+miR-370组人晶状体上皮细胞SOD和CAT活性降低,MDA含量、细胞凋亡率、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均为P<0.001).结论 高糖诱导的人晶状体上皮细胞中miR-370的表达升高,榅桲总黄酮可抑制高糖诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡,其作用机制可能与其能降低miR-370表达有关.
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