DCLRE1A调控线粒体生物发生在年龄相关性白内障发生发展中的作用
DCLRE1A regulates mitochondrial biogenesis and participates in the develop-ment of age-related cataracts
摘要目的 探究DNA交联修复1A(DCLRE1A)对晶状体上皮细胞(LECs)中线粒体功能的影响.方法 选择30例30眼年龄相关性白内障(ARC)患者,分为ARC皮质型(ARCC组)、ARC核型(ARNC组)、ARC后囊下型(ARPC组),每组各10例.同时选择同期我院就诊的10例10眼年龄匹配的诊断为黄斑前膜的透明晶状体患者为对照组.West-ern blot检测各组患者前囊膜组织中以及体外经过氧化氢(H2O2)处理的晶状体上皮细胞株(SRA01/04)氧化损伤模型和过表达DCLRE1A模型(OE-DCLRE1A组)中DCLRE1A蛋白表达水平,检测过表达DCLRE1A对线粒体转录因子(TFAM)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC1α)蛋白表达水平的影响.将正常培养的SRA01/04细胞随机分为Control组(未经任何处理)、H2O2组、H2O2+HA组(转染对照质粒HA)、H2O2+OE-DCLRE1A组(转染质粒DCLRE1A),RT-PCR测定各组细胞mtDNA表达,免疫荧光染色法检测各组细胞线粒体膜电位(MMP)和线粒体活性氧(ROS)的变化.结果 Western blot检测结果显示,与对照组相比,ARCC组、ARNC组、ARPC组患者晶状体前囊膜组织中DCLRE1A蛋白相对表达水平均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.001).体外诱导的H2O2细胞氧化损伤模型中,与Control组相比,H2O2组细胞中DCLRE1A蛋白相对表达水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.001).DCLRE1A 过表达效率结果显示,与Con-trol 组相比,OE-DCLRE1A组细胞中DCLRE1A蛋白相对表达水平显著增加,差异有统计学意义(P<0.001).RT-PCR检测结果显示,与H2O2+HA组相比,H2O2+OE-DCLRE1A组细胞中mtDNA表达水平明显上升,差异有统计学意义(P<0.001).Western blot检测结果显示,与H2O2+HA组相比,H2O2+OE-DCLRE1A组细胞中TFAM和PGC1α蛋白相对表达水平均明显上升,差异均有统计学意义(均为P<0.001).免疫荧光染色结果显示,与H2O2+HA组相比,H2O2+OE-DCLRE1A组细胞中MMP水平明显恢复,线粒体ROS累积减少,差异均有统计学意义(均为P<0.001).结论 在H2O2诱导的氧化应激条件下,DCLRE1A通过调控线粒体生物发生促进LECs内损伤性mtDNA的修复,从而减少LECs凋亡,参与ARC的发生发展.
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