家兔角膜碱烧伤的关键基因筛选和分析:基于转录组学和生物信息学技术
Screening and analysis of key genes in alkali burn-induced corneal injury in rabbits:based on transcriptomic and bioinformatic technologies
摘要目的 应用转录组学与生物信息学技术筛选和分析家兔角膜碱烧伤的关键基因.方法 选取健康雄性新西兰家兔30只,随机分为2组(每组15只):正常组不予任何干预;碱烧伤组建立角膜碱烧伤模型.采用HE染色对角膜组织进行组织学评估,通过转录组学测序技术进行建库测序,DESeq2鉴定出差异表达的基因,对差异基因集进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析.构建蛋白质-蛋白质相互作用网络筛选关键基因并通过 RT-PCR验证关键基因的mRNA表达水平.结果 HE染色结果显示,正常组家兔角膜基质层排列规则,基质细胞散在分布;碱烧伤组家兔角膜基质层水肿增厚,胶原纤维排列疏松、紊乱,纤维细胞和炎症细胞增多.与正常组相比,碱烧伤组共鉴定出1 827个显著性差异表达基因,其中1 495个基因显著上调,332个基因显著下调.GO功能富集分析显示富集于免疫反应、质膜及同源蛋白结合等,KEGG通路富集分析显示富集于癌症相关通路、脂质与动脉粥样硬化、神经活性配体-受体相互作用等.蛋白质-蛋白质相互作用网络筛选出中性粒细胞胞质因子1(NCF1)、中性粒细胞胞质因子2(NCF2)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、白细胞介素-1α(IL-1α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(CXCL8)、白细胞分化抗原4(CD4)、趋化因子2(CCL2)及肿瘤坏死因子(TNF)共11个关键基因.RT-PCR验证碱烧伤组家兔角膜组织中关键基因的mRNA表达水平均高于正常组(均为P<0.05),与转录组学测序结果一致.结论 本研究基于家兔角膜碱烧伤模型,通过转录组学与生物信息学技术筛选出11个关键基因(NCF1、NCF2、MMP2、MMP9、IL-1α、IL-1 β、IL-6、CXCL8、CD4、CCL2、TNF).
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