川陈皮素调节Hippo/YAP信号通路对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞损伤的影响
Effect of nobiletin on high glucose-induced injury of human retinal vascular endothelial cells by adjusting the Hippo/YAP signaling pathway
摘要目的 探讨川陈皮素调节 Hippo/YAP 信号通路对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞损伤的影响.方法 将人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)分为对照组、高糖组、L-川陈皮素组、M-川陈皮素组、H-川陈皮素组、川陈皮素+PY-60 组.对照组HRMEC 在浓度为5.5 mmol·L-1葡萄糖条件下培养,同时补充25.0 mmol·L-1甘露醇以达到相同的渗透压,高糖组、L-川陈皮素组、M-川陈皮素组、H-川陈皮素组、川陈皮素+PY-60 组HRMEC 在含25.0 mmol·L-1葡萄糖的培养基中培养.48 h后,对照组、高糖组HRMEC采用正常培养基培养,L-川陈皮素组、M-川陈皮素组、H-川陈皮素组分别采用含16 μmol·L-1、32 μmol·L-1、64 μmol·L-1 川陈皮素的培养基培养,川陈皮素+PY-60组采用含64 μmol·L-1川陈皮素和 10 μmol·L-1 PY-60 的培养基培养.CCK-8 测定各组细胞的相对细胞活力;基质胶观察各组细胞的血管生成;Transwell 实验检测各组细胞的迁移能力;二氢罗丹明 123 测定各组细胞的活性氧(ROS)水平;JC-1 染色测定各组细胞的线粒体膜电位变化;Western blot 法检测各组细胞 P-YAP1 蛋白表达.结果 与对照组相比,高糖组 HRMEC 的相对细胞活力、JC-1 比值、p-YAP1 蛋白水平均降低,血管形成分支数和迁移细胞数增加,ROS 相对荧光强度提高(均为 P<0.05);与高糖组相比,L-川陈皮素组、M-川陈皮素组、H-川陈皮素组 HRMEC 的相对细胞活力、JC-1比值、p-YAP1 蛋白水平逐渐提高,血管形成分支数和迁移细胞数逐渐减少,ROS 相对荧光强度逐渐降低(均为 P<0.05);与 H-川陈皮素组相比,川陈皮素+PY-60 组HRMEC 的相对细胞活力降低,血管形成分支数增加,迁移细胞数增加,ROS 相对荧光强度提高,JC-1 比值降低,p-YAP1 蛋白表达降低(均为 P<0.05).结论 川陈皮素通过激活 Hippo 途径,促进 YAP1 磷酸化减轻高糖诱导的 HRMEC 损伤.
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