大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、培养与鉴定

The Isolation、Culture and Identification of Alveolar Epithelial cells Ⅱ in Rats

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摘要目的:对大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)进行分离、培养,观察其体外生长规律,计算细胞生长活力,并对其进行细胞鉴定.方法:采用SPF级SD大鼠,使用酶消化法分离AEC Ⅱ,IgG免疫吸附法得到高纯度的AEC Ⅱ后,对AEC Ⅱ进行原代培养,应用倒置显微镜观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线,台盼蓝染色计算细胞生长活力,透射电镜观察AEC Ⅱ细胞形态,免疫荧光检测AEC Ⅱ表面特异性活性蛋白C(SP-C)的表达,免疫印迹法检测AEC Ⅱ表面特异性蛋白SP-C的表达.结果:获得AEC Ⅱ细胞数为(3.7±1.3)×106个/只,AEC Ⅱ在24h-36h生长迅速,培养72h后生长达到高峰,随后细胞生长缓慢,细胞数开始减少,细胞活力为92.6％±1.8％,细胞纯度达到93.2％±0.8％,透射电镜下可观察到AEC Ⅱ的特异性结构—板层小体,荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的SP-C表达,免疫印迹法检测到AEC Ⅱ表面SP-C阳性表达.结论:利用酶消化法和IgG免疫吸附法可获得纯度较高的AEC Ⅱ,原代培养后细胞良好生长,可为AEC Ⅱ导致的肺纤维化等疾病提供体外模型.